活性氧（ROS）是含氧的化學(xué)反應性分子（如超氧化物，羥基，單線(xiàn)態(tài)氧和過(guò)氧化物）。由于存在不成對的價(jià)電子，ROS具有高反應性。 ROS形成氧的正常代謝的天然副產(chǎn)物，并且在細胞信號傳導和體內平衡中具有重要作用。然而，在環(huán)境壓力（例如，UV或熱暴露）期間，ROS水平可顯著(zhù)增加。這可能導致細胞結構的顯著(zhù)損害。累積地，這被稱(chēng)為氧化應激。 ROS也由外源性源如電離輻射產(chǎn)生。在氧化應激條件下，ROS產(chǎn)生顯著(zhù)增加，導致隨后膜脂，蛋白質(zhì)和核酸的改變。這些生物分子的氧化損傷與衰老以及各種病理事件有關(guān)，包括動(dòng)脈粥樣硬化，致癌作用，缺血性再灌注損傷和神經(jīng)退行性疾病。細胞滲透性ROS Brite APF和HPF試劑是非熒光的并且在與羥基自由基或過(guò)氧亞硝酸根陰離子反應時(shí)產(chǎn)生亮綠色熒光（激發(fā)/發(fā)射= 490 / 515nm），APF也將與次氯酸根陰離子（OCl-）反應。此外，APF和HPF在過(guò)氧化物酶存在下也與過(guò)氧化氫反應。可以使用熒光成像，高內容成像，微孔板熒光測定法或流式細胞術(shù)測量所得熒光。 APF和HPF顯示出對光誘導氧化的相對高的抗性。 APF和HPF在與羥基或過(guò)氧亞硝酸根陰離子反應之前是非熒光的。

ROS Brite 染料的分析方案

該方案僅提供指南，實(shí)際應根據您的具體需求進(jìn)行修改。在制備ROS Brite 工作溶液之前，根據需要處理細胞。

1）在DMSO中制備10至20mM ROS Brite APF（或HPF）儲備溶液。通過(guò)將DMSO儲備溶液稀釋到含有20mM Hepes緩沖液（HHBS）的Hanks溶液中，制備1至10μM的工作溶液。

2）根據需要處理細胞（例如，用50-100nM血管緊張素II處理RASM細胞3-5小時(shí)）。

3）用ROS Brite APF（或HPF）（1-10μM，步驟＃1）在37℃孵育細胞20-60分鐘。

4）用HHBS緩沖液替換染料加載溶液。

5）用適當的熒光儀器在Ex / Em = 490 / 525mm（截止= 515nM）下用底部讀取模式分析細胞（例如，用于熒光顯微鏡的FITC濾光片，用于流式細胞儀的FL1濾光片）。

注意：BSA和酚紅會(huì )影響熒光，應謹慎使用。 APF和HPF均可用于溶液測定或細胞內測量。